文章目录

1 资料与方法

1.1 标本收集

1.2 主要材料

1.3 实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)

1.4 细胞培养

1.5 细胞转染

1.6 Western bolt

1.7 荧光素酶报告基因实验

1.8 统计学处理

2 结 果

2.1 IA患者和健康对照者血清miR-181表达水平比较

2.2 miR-181抑制VSMC表型转换

2.3 TGFBR1是miR-181的直接靶点

2.4 IA组织中TGFBR1蛋白表达水平

2.5 miR-181靶向调控TGFBR1的蛋白表达水平

3 讨 论

文章摘要:目的探讨颅内动脉瘤（IA）中miR-181在血管平滑肌细胞（VSMC）表型转换中的作用及机制。方法收集邯郸市中心医院神经外科确诊为IA的患者80例,以及同期健康体检中心80例年龄、性别匹配的健康对照者作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测IA患者和健康对照者血清miR-181水平。miR-181模拟物（miR-181 mimics）转染人脑VSMC检测收缩表型基因α-平滑肌肌动蛋白（SMA）、平滑肌22α蛋白（SM22α）、合成表型基因骨桥蛋白（OPN）及基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的表达水平。采用TargetScan软件预测miR-181的靶基因,根据预测结果,采用双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-181与转化生长因子β受体1（TGFBR1）的靶向调控关系;采用Western bolt检测手术中取出的IA组织和接受颅脑治疗的创伤患者的颞浅动脉组织中TGFBR1的表达水平。细胞中过表达TGFBR1同时转染miR-181 mimics检测SMA、SM22α和OPN的表达水平。结果 qPCR检测结果显示,IA患者与健康对照者比较,血清miR-181表达水平降低。Western bolt检测结果显示,miR-181 mimics转染VSMC后SMA、SM22α的表达水平升高,OPN、MMP-2、MMP-9表达水平降低。TargetScan软件预测结果显示,TGFBR1为miR-181的靶向调控基因,双荧光素酶报告基因检测结果显示,较TGFBR1-mut与NC mimics共转染组比较,TGFBR1与miR-181 mimics共转染组荧光素酶活性强度明显降低。IA组织较正常颞浅动脉组织中TGFBR1-wt的蛋白表达水平升高。与单独miR-181 mimics转染组比较,细胞中过表达TGFBR1同时转染miR-181 mimics后SMA、SM22α表达水平降低,OPN表达水平升高。结论 IA中miR-181表达水平降低,TGFBR1表达水平升高。过表达miR-181通过调控TGFBR1的表达水平抑制平滑肌细胞表型转换。

文章关键词:

论文分类号:R739.41